CONSERVAÇÃO IN VITRO E EX SITU E VALORIZAÇÃO DE ENDEMISMOS IBÉRICOS DAS APIACEAE PORTUGUESAS

Ana Cristina Pessoa Tavares dos Santos

Caracterização e avaliação da atividade antifúngica dos óleos essenciais

Seguindo a metodologia descrita na secção respetiva (2.3.) procedeu-se à colheita de plantas para extração, caracterização e estudo da atividade antifúngica dos óleos essenciais.

Daucus carota subsp. halophilus

Composição química

Os óleos essenciais de Daucus carota subsp. halophilus foram extraídos com rendimentos de 0,4% para as umbelas em antese e variando entre 0,6% e 1%  (v/p) nas umbelas com frutos maduros.
Os óleos foram analisados por CGL e CGL-EM e a composição qualitativa e quantitativa está apresentada na Tabela 31, onde os compostos estão listados em ordem de eluição na coluna de polidimetilsiloxano.
A composição dos óleos obtidos a partir de umbelas colhidas em duas localidades diferentes do Algarve (Cabo de S. Vicente e Arrifana) é no geral semelhante. No entanto, existem algumas diferenças importantes entre os óleos, dependendo do estágio de desenvolvimento da planta, particularmente na quantidade de fenilpropanóides. As amostras obtidas de umbelas em antese são predominantemente constituídas por hidrocarbonetos monoterpénicos (64,9-76,8%), sendo o sabineno o principal constituinte (28,3-33,8%), enquanto os principais compostos dos óleos obtidos a partir das umbelas com frutos maduros são a elemicina (26-31%) e o sabineno (27,6-29%). A elemicina atinge apenas 6,2% e 5,9%, respetivamente, nos óleos obtidos de umbelas em antese (amostras 1 e 3).

Tabela 31: Composição química dos óleos essenciais de Daucus carota subsp. halophilus no Algarve: Cabo de S. Vicente e Arrifana (amostras 1 e 3 – umbelas em antese; amostras 2 e 4 – umbelas com frutos maduros).


IRa

IRb

Compostosa

Percentagem (%)

Cabo de S. Vicente

Arrifana

1

2

3

4

922

1030

α-Tujeno

0,4

0,3

0,4

0,2

930

1030

α-Pineno

12,6

10,1

16,0

12,2

943

1073

Canfeno

0,5

0,5

1,0

0,3

964

1128

Sabineno

28,3

27,6

33,8

29,0

970

1118

β-Pineno

2,3

2,8

5,1

2,5

980

1161

Mirceno

3,2

2,6

4,7

2,0

997

1171

α-Felandreno

v

v

0,1

0,1

1010

1187

α-Terpineno

1,4

0,4

1,4

0,3

1011

1275

p-Cimeno

0,1

0,3

0,1

0,2

1020

1206

Limoneno

11,8

6,5

11,0

5,5

1020

1215

β-Felandreno

0,5

0,2

v

0,1

1025

1235

Z-β-Ocimeno

0,5

0,2

0,2

0,1

1035

1250

E-β-Ocimeno

0,1

v

v

v

1046

1249

g-Terpineno

2,6

0,8

2,3

1,0

1050

1458

trans-Hidrato de sabineno

0,2

0,4

0,3

0,3

1076

1288

Terpinoleno

0,5

0,2

0,6

0,2

1081

1543

Linalol

0,5

1,1

1,2

1,0

1081

1542

cis-Hidrato de sabineno

0,1

0,1

0,2

0,1

1105

1556

cis-p-2-Menteno-1-ol

0,3

0,2

0,4

0,1

1118

1515

Cânfora

0,1

v

1120

1620

trans-p-2-Menteno-1-ol

0,2

0,1

v

v

1135

1553

Pinocarvona

0,1

v

v

1144

1695

Borneol

v

v

v

1158

1597

Terpineno-4-ol

4,8

2,1

4,1

2,0

1169

1692

α-Terpineol

0,3

0,2

0,3

0,2

1177

1673

cis-Piperitol

v

0,1

v

v

1187

 

trans-Piperitol

v

v

v

1264

1574

Acetato de bornilo

0,2

0,3

0,6

0,1

1330

 

d-Elemeno

0,3

0,4

0,6

0,4

1328

1688

α-Acetato de terpenilo

0,4

0,1

0,1

0,1

1346

 

α-Longipineno

0,3

0,1

v

0,1

1369

1487

α-Copaeno

v

v

v

0,1

1369

2006

Metileugenol

0,3

0,1

0,1

t

1383

1586

β-Elemeno

v

0,1

v

0,1

1405

1563

α-Cedreno

0,3

0,1

v

0,1

1411

1563

Aristoleno

0,2

0,2

v

v

1411

1590

E-β-Cariofileno

1,4

0,8

0,6

0,5

1442

1662

α-Humuleno

0,1

0,1

v

v

1446

1661

trans-β-Farnesol

0,3

0,2

v

v

1461

2219

E-Metilisoeugenol

7,4

6,9

0,7

0,5

1466

1699

Germacreno D

0,3

0,2

0,1

0,1

1484

1724

Biciclogermacreno

0,3

0,2

0,3

0,2

1489

 

β-Himachaleno

0,3

0,1

0,1

0,1

1498

1720

β-Bisaboleno

5,3

1,8

0,4

0,4

1508

1751

d-Cadineno

0,6

0,2

0,3

0,2

1518

 

Elemicina

6,2

26,0

5,9

31,0

1530

1766

E-α-Bisaboleno

0,3

0,2

v

0,1

1542

1816

Germacreno B

0,2

0,1

v

0,1

1557

1968

Óxido de Cariofileno

0,1

0,3

0,3

0,2

1618

2174

T-Muurolol

0,3

0,2

v

v

1630

2219

T-Cadinol

0,1

0,2

0,1

0,1

1630

2216

α-Cadinol

0,7

0,2

0,2

0,1

1663

 

β-Bisabolol

0,1

0,1

v

v

1668

 

Cânfora de juniperus

0,7

0,6

0,3

0,2

1777

 

Isocalamendiol

0,3

0,3

0,1

0,1

 

    

Hidrocarbonetos monoterpénicos

64,9

52,6

76,8

53,8

 

 

Monoterpenos oxigenados

7,1

5,0

7,5

4,0

 

 

Hidrocarbonetos sesquiterpénicos

10,0

4,6

2,8

2,7

 

 

Sesquiterpenos oxigenados

2,6

2,1

1,2

0,8

 

 

Fenilpropanoides

13,9

33,0

6,7

31,6

 

 

Total identificado

98,5

97,3

95,0

92,9

v: vestígios (< 0.05 %); IRa: Índices de retenção na coluna SPB-1; IRb: Índices de retenção na coluna SupelcoWax-10.
a Compostos ordenados por ordem de eluição na coluna SPB-1.

Parte do material propagado in vivo e in vitro foi utilizado para a caracterização dos óleos essenciais. Conforme referimos, a utilização de plantas micropropagadas permite a obtenção dos óleos de material vegetal a crescer em condições controladas, contribuindo simultaneamente para uma maior uniformidade dos óleos obtidos e para uma redução dos impactes ambientais negativos resultantes de uma recolha abusiva de plantas no campo.
Assim, as plantas micropropagadas de Daucus carota subsp. halophilus e instaladas nos viveiros do JBUC, completaram o ciclo de vida formando umbelas com frutos maduros que foram utilizadas para a extração dos óleos, seguindo a mesma metodologia, tendo-se observado que tinham composição química idêntica às plantas silvestres.

Atividade antifúngica

Os óleos mostraram uma variabilidade de inibição para os vários fungos testados, como se pode observar na Tabela 32. Os dermatófitos mostraram maior sensibilidade para estes óleos quando comparados com as leveduras e outros fungos filamentosos. A amostra com teores elevados de elemicina (amostra 2) mostrou ser a mais ativa com valores de CMI e CML entre 0,16 e 0,32 µL /mL e 0,32 e 0,64 µL/mL, respetivamente (Tabela 32).

Tabela 32: Atividade antifúngica (CMI e CML) dos óleos de Daucus carota subsp. halophilus contra estirpes de leveduras, dermatófitos e Aspergillus (amostra 1 – umbelas em antese; amostra 2 – umbelas com frutos maduros).


Estirpes

Amostra 1

Amostra 2

Fluconazol

Anfotericina B

CMIa

CMLa

CMIa

CMLa

CMIb

CMLb

CMIb

CMLb

Candida albicans
ATCC 10231

2,5

2,5

1,25

1, 25

1

>128

N.T.c

N.T.

Candida tropicalis
ATCC 13803

2,5

2,5

1,25

1,25

4

>128

N.T.

N.T.

Candida krusei
H9

2,5

2,5

2,5

2,5

64

64-128

N.T.

N.T.

Candida guillermondii
MAT23

1,25

1,25

1,25

1,25

8

8

N.T.

N.T.

Candida parapsilosis
ATCC 90018

1,25

2,5

1,25

2,5

<1

<1

N.T

N.T.

Cryptococcus neoformans
CECT 1078

0,32

0,64

0,32-0,64

1,25

16

128

N.T.

N.T.

Trichophyton mentagrophytes
FF7

0,64

0,64-1,25

0,16-0,32

0,64

16-32

32-64

N.T.

N.T.

Microsporum canis
FF1

0,64

0,64

0,32

0,32

128

128

N.T.

N.T.

Trichophyton rubrum
CECT 2794

0,64

0,64-1,25

0,32

0,32-0,64

16

64

N.T.

N.T.

Microsporum  gypseum
CECT 2905

0,64

0,64-1,25

0,32

0,64

128

>128

N.T.

N.T.

Epidermophyton floccosum
FF9

0,64

0,64

0,32

0,32

16

16

N.T.

N.T.

Aspergillus niger
ATCC16404

1,25

>20

10

>20

N.T.

N.T.

1–2

4

Aspergillus fumigatus
ATCC 46645

1,25

≥20

2,5

>20

N.T.

N.T.

2

4

Aspergillus flavus
F44

2,5

>20

20

>20

N.T.

N.T.

2

8

Resultados obtidos em três experiências independentes desenvolvidas em duplicado.
a CMI e CML determinados pelo método de macrodiluição e expressos em microlitro por mililitro (v/v).
b CMI e CML determinados pelo método de macrodiluição e expressos em micrograma por mililitro (p/v).
c Não testado.

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