CONSERVAÇÃO IN VITRO E EX SITU E VALORIZAÇÃO DE ENDEMISMOS IBÉRICOS DAS APIACEAE PORTUGUESAS

Ana Cristina Pessoa Tavares dos Santos

Ensaios de cultura in vitro

Material vegetal

As sementes dos diferentes taxa foram recolhidas em habitat natural (Tabela 5) e mantidas à temperatura ambiente até ao início das experiências.

Tabela 5: Dados da colheita de sementes para cultura in vitro.


Taxa

Data e local de colheita das sementes /coordenadas GPS

1. Daucus carota subsp. halophilus

Junho. Cabo de São Vicente, Algarve. 37° 1' 30" N 8° 59' 40" W.

2. Distichoselinum tenuifolium

Agosto. Moncarapacho, Algarve. 37° 8 ' 41" N 7°7' 88 " W.

3. Angelica pachycarpa

Maio. Ilha Berlenga. 39° 24′ N 9° 30′ W.

4. Seseli montanum subsp. peixotoanum

Setembro a novembro. Alimonde-Carrazede e Samil-Bragança, Trás-os-Montes. 41° 48' N 06° 45' W.

5. Eryngium duriaei

Setembro. Mata da Margaraça e Serra da Estrela. 40° 19' 18.72" N e 7° 36' 46.68" W.

No caso de Daucus carota subsp. halophilus utilizaram-se também segmentos nodais (até 1,5 cm comprimento) de plantas silvestres colhidas no Cabo de São Vicente, no Algarve, durante o mês de abril.
Numa segunda fase, na indução de embriogénese somática, foram usadas, nas mesmas condições, sementes de plantas micropropagadas de Angelica pachycarpa e de Distichoselinum tenuifolium instaladas em viveiro no Jardim Botânico da Universidade de Coimbra.

Germinação de sementes, tipos de explantes e cultura de segmentos nodais

A esterilização das sementes para ulterior isolamento e cultura de diferentes porções das plântulas (ápices caulinares, segmentos de raiz, de pecíolo e de folhas cotiledonares) e dos segmentos nodais seguiu um procedimento similar em todos os taxa testados. Assim, procedeu-se primeiro a um tratamento com etanol (90 % v/v) durante 1 min. seguido de transferência para uma solução de hipoclorito de cálcio a 7 % (p/v) contendo 2-3 gotas de Tween-20, durante 20 min. Após três lavagens em água bidestilada esterilizada, o material ficou em embebição durante a noite. De seguida procedeu-se a uma nova esterilização seguindo o mesmo procedimento com hipoclorito de cálcio e em condições assépticas, numa câmara de fluxo laminar.
Dependendo do tamanho, 3 a 10 sementes foram inoculadas em tubos de ensaio contendo o meio MS (Murashige e Skoog, 1962) com os macronutrientes reduzidos a metade da concentração e 3% de sacarose. O pH de todos os meios foi ajustado a 5,8 com KOH (0,1-1,0N) tendo-se em seguida adicionado 0,6 % de agar (Merck). Os meios foram autoclavados a 121ºC (120 kPa) durante 20 min. No caso das culturas in vitro de Seseli montanum subsp. peixotoanum o pH foi ajustado para valores de 6,0-6,2.
Após 30-45 dias de germinação in vitro das sementes, diferentes tipos de explantes, para estabelecimento das culturas em meios de crescimento in vitro, foram isolados a partir das plântulas, nomeadamente:
1 - ápices caulinares (até 0,5 cm);
2 - raiz (porções apicais 0,5-1 cm);
3 - folhas cotiledonares (limbo do primeiro par de folhas – segmentos foliares 0,5-1 cm);
4 - pecíolos do primeiro par de folhas (0,5-1 cm).
As culturas foram mantidas a 25ºC, numa câmara de cultura sob um regime de iluminação diária (16h de luz) de 15-20 µmol m−2 s−1, de radiação fotossinteticamente ativa, fornecida por lâmpadas de luz fria, fluorescente e branca.

Os explantes utilizados, os meios de cultura e os tipos de resposta morfogénica verificados nos diferentes taxa foram diferentes. Nas secções seguintes são descritos os ensaios realizados com cada um dos taxa testados.

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