6. Nitrito

Determinar la concentración de nitritos de una muestra de agua.

6.1. Fundamento
Este método llamado de Zambelli, se basa en la reacción del ácido sulfanílico, en medio clorhídrico y en presencia de ion amonio y fenol, con el grupo NO2-, lo que da lugar a la aparición de un compuesto de color amarillo-pardo. Este puede ser medido espectrofotométricamente a una longitud de onda de 425 nm y la absorbancia es proporcional a la concentración de nitritos en la muestra.

6.2. Ámbito de aplicación
El método es aplicable a aguas crudas, de proceso, aguas naturales, y aguas tratadas. No obstante, está dirigido fundamentalmente a verificar el cumplimiento de la legislación vigente para aguas potables (£ 0.1 mg/L, artículo 8, Decreto 475/98) o para las aguas destinadas a consumo humano y doméstico previo tratamiento

6.3. Interferencias
En la medición de la absorción del complejo formado, pueden interferir alta turbidez y color presentes en las muestras. La turbidez puede disminuirse con filtración y/o centrifugación previa. Para muestras con color, es necesario analizar un blanco de muestra leyendo la absorción de esta a 425 nm sin adicionar los reactivos para el desarrollo del color.

6.4. Descripción de la metodología analítica

6.4.1. Colección, preservación y almacenaje de muestras:
Las muestras pueden colectarse en frascos plásticos o de vidrio. No existe método de preservación. Deben analizarse sin dilación para evitar la conversión a nitratos por las bacterias. En caso de requerirse almacenamiento por corto plazo, éste debe realizarse por refrigeración a 4°C o congelación a - 20°C por un tiempo no mayor de 24-48 horas.

6.4.2. Equipos y materiales:

• Espectrofotómetro para trabajar a 425 nm con cubetas de vidrio o cuarzo de 1 ó 5 cm de paso óptico.
• Vidriería de borosilicato lavada con agua y detergente, enjuagados con abundante agua potable y con agua destilada.

6.4.3. Reactivos:
Todos los reactivos son de grado analítico, excepto se indique alguna especificación.

• Reactivo de Zambelli: diluir 260 mL de ácido clorhídrico concentrado con 500 mL de agua destilada. Añadir 5.0 g de ácido sulfanílico y 7.5 g de fenol y calentar suavemente hasta disolverlos. Agregar 135 g de NH4Cl y disolverlos. Dejar enfriar y completar hasta 1000 mL con agua destilada en matraz aforado. Almacenar en refrigeración hasta seis meses en frasco ámbar.
• Amoníaco concentrado.
• Solución Madre de Nitritos: pesar 149.88 mg de nitrito de sodio (NaNO2), disolverlos y enrasar con agua destilada en un matraz aforado de 1000 mL, previa adición de 1 mL de cloroformo. Un mL de esta solución contiene 0.1 mg de NO2-. Almacenar en refrigeración hasta seis meses en frasco ámbar.
• Solución Intermedia de Nitritos: tomar 10 mL de la Solución Madre de Nitrito y llevarla a 1000 mL con agua destilada. Esta Solución contiene 0.001 mg NO2- por un mL y se debe preparar al momento de usar.
• Solución Patrón de Nitritos: tomar 50 mL de la Solución Intermedia de nitritos y llevarla a 1000 mL con agua destilada. Un mL de esta solución es equivalente a 0.00005 mg de NO2- y se debe preparar al momento de usar.

6.4.4. Procedimiento:
Las condiciones ambientales no son críticas para la realización de este ensayo.

Preparación de la curva de calibración:

• Pipetear volúmenes crecientes de la solución patrón o de la solución intermedia de nitritos y completar a volumen con agua destilada para obtener al menos seis concentraciones comprendidas en el rango 0.000- 0.200 mg/L:
• Transferir los estándares anteriores a vasos de precipitado de 100 mL. Añadir 2 mL de reactivo de Zambelli. Agitar para mezclar bien y esperar 2 minutos.
• Añadir 2 mL de amoníaco y agitar.
• Leer inmediatamente en espectrofotómetro a 425 nm con cubetas de paso óptico de 1 ó 5 cm.

Verificación de la curva de calibración:
Cada vez que se analicen muestras, no es necesario construir una nueva curva de calibración, sino verificar la validez de la existente. En este caso, se prepara un estándar de concentración 0.050 mg/L y se lee como si fuera una muestra. Si el resultado es coincidente ± 10 %, se considera que la curva es válida y se procede a preparar y leer las muestras. En caso negativo, verificar los reactivos, y si es necesario, prepararlos nuevamente y construir una nueva curva de calibración.

Determinación de nitritos en muestras:

• Transferir 50 mL de muestra (previamente filtrada por membrana de 0.45 mm o sometida a centrifugación, en caso de ser necesario por presentar alta turbiedad), a un vaso de precipitados de 100 mL, adicionarle 2 mL de reactivo de Zambelli. Agitar para mezclar bien y esperar 2 minutos.
• Añadir 2 mL de amoníaco, agitar y esperar 5 minutos.
• Preparar y analizar un blanco de reactivos con agua bidestilada.
• Leer en espectrofotómetro a 425 nm con cubetas de paso óptico de 1cm respecto a la curva de calibración de nitritos.

6.5. Presentación de resultados
El resultado se obtendrá directamente en la curva de calibración del espectrofotómetro y se expresará con tres cifras decimales. Se debe consultar los datos de la curva vigente para informar aquellos resultados que resulten menores al límite de cuantificación.

Bibliografía

• Rodier, J (1990) Análisis de las aguas: aguas naturales, aguas residuales, agua de mar. Ediciones Omega, S. A., Barcelona, 149-151.
• BOE (1987) Orden de 1 de julio de 1987 por la que se aprueban los métodos oficiales de análisis fisico-químicos para aguas potables de consumo humano. Ministerio de las Cortes y Secretaría de Gobierno de España, N° 163, 20916-20917.
• APHA-AWWA-WEF (1998) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 20th Edition. New York, 3-75 y 3-76, método 3500.
• Ministerio de Salud de Colombia (1998) Decreto 475.
• Ministerio de Salud de Colombia (1984) Decreto 1594.